Un o brif fanteision diwylliant celloedd yw'r gallu i drin cemeg ffisegol atgenhedlu celloedd (hy tymheredd, pH, pwysedd osmotig, tensiwn O2 a CO2) a'r amgylchedd ffisiolegol (hy crynodiad hormonau a maetholion).Yn ogystal â thymheredd, mae'r amgylchedd diwylliant yn cael ei reoli gan y cyfrwng twf.
Er nad yw amgylchedd ffisiolegol diwylliant mor glir â'i amgylchedd ffisegol a chemegol, gwell dealltwriaeth o gydrannau serwm, nodi ffactorau twf sy'n ofynnol ar gyfer amlhau, a gwell dealltwriaeth o ficro-amgylchedd celloedd mewn diwylliant.(hy rhyngweithio cell-gell, trylediad nwy, rhyngweithio â'r matrics) bellach yn caniatáu i linellau cell penodol gael eu meithrin mewn cyfryngau serwm-rhydd.
1. Mae amgylchedd diwylliant yn effeithio ar dwf celloedd
Sylwch fod yr amodau diwylliant celloedd yn wahanol ar gyfer pob math o gell.
Mae canlyniadau gwyro oddi wrth yr amodau meithrin sy'n ofynnol ar gyfer math penodol o gell yn amrywio o fynegiant ffenoteipiau annormal i fethiant llwyr diwylliant celloedd.Felly, rydym yn argymell eich bod yn dod yn gyfarwydd â'r llinell gell y mae gennych ddiddordeb ynddi a dilyn yn llym y cyfarwyddiadau a ddarperir ar gyfer pob cynnyrch a ddefnyddiwch yn eich arbrawf.
2.Rhagofalon ar gyfer creu amgylchedd diwylliant celloedd wedi'i optimeiddio ar gyfer eich celloedd:
Diwylliant cyfryngau a serwm (gweler isod am ragor o wybodaeth)
lefelau pH a CO2 (gweler isod am ragor o wybodaeth)
Meithrin plastig (gweler isod am ragor o wybodaeth)
Tymheredd (gweler isod am ragor o wybodaeth)
2.1 Cyfryngau Diwylliannol a Serwm
Y cyfrwng diwylliant yw'r rhan bwysicaf o'r amgylchedd diwylliant, oherwydd ei fod yn darparu'r maetholion, y ffactorau twf a'r hormonau sydd eu hangen ar gyfer twf celloedd, ac yn rheoleiddio pH a phwysau osmotig y diwylliant.
Er bod yr arbrofion diwylliant celloedd cychwynnol yn cael eu perfformio gan ddefnyddio cyfryngau naturiol a gafwyd o ddarnau meinwe a hylifau'r corff, arweiniodd yr angen am safoni, ansawdd y cyfryngau, a galw cynyddol at ddatblygiad cyfryngau diffiniol.Y tri math sylfaenol o gyfryngau yw cyfryngau gwaelodol, cyfryngau serwm llai a chyfryngau di-serwm, ac mae ganddynt ofynion gwahanol ar gyfer ychwanegiad serwm.
2.1.1 Cyfrwng sylfaenol
Cyfrwng diwylliant cell Gibco
Mae'r rhan fwyaf o linellau celloedd yn tyfu'n dda mewn cyfryngau sylfaenol sy'n cynnwys asidau amino, fitaminau, halwynau anorganig, a ffynonellau carbon (fel glwcos), ond rhaid ategu'r fformwleiddiadau cyfryngau sylfaenol hyn â serwm.
2.1.2 Cyfrwng serwm llai
Potel gyda Gibco Isel Serwm Canolig
Strategaeth arall i leihau effeithiau andwyol serwm mewn arbrofion meithrin celloedd yw defnyddio cyfryngau â llai o serwm.Mae cyfrwng serwm llai yn fformiwla gyfrwng sylfaenol sy'n llawn maetholion a ffactorau sy'n deillio o anifeiliaid, a all leihau faint o serwm sydd ei angen.
2.1.3 Cyfrwng di-serwm
Potel gyda chyfrwng di-serwm Gibco
Mae cyfrwng di-serwm (SFM) yn osgoi'r defnydd o serwm anifeiliaid trwy ddisodli serwm â fformwleiddiadau maeth a hormonau priodol.Mae gan lawer o ddiwylliannau cynradd a llinellau celloedd fformwleiddiadau cyfrwng di-serwm, gan gynnwys llinell gynhyrchu protein ailgyfunol Ofari Hamster Tsieineaidd (CHO), llinellau celloedd hybridoma amrywiol, llinellau pryfed Sf9 a Sf21 (Spodoptera frugiperda), yn ogystal ag ar gyfer y gwesteiwr ar gyfer cynhyrchu firws (er enghraifft, 293, VERO, MDCK, MDBK), ac ati. Un o brif fanteision defnyddio cyfrwng di-serwm yw'r gallu i wneud y cyfrwng yn ddetholus ar gyfer mathau penodol o gelloedd trwy ddewis cyfuniad priodol o ffactorau twf.Mae'r tabl canlynol yn rhestru manteision ac anfanteision cyfryngau di-serwm.
Mantais
Cynyddu eglurder
Perfformiad mwy cyson
Puro haws a phrosesu i lawr yr afon
Asesu gweithrediad celloedd yn gywir
Cynyddu cynhyrchiant
Gwell rheolaeth ar adweithiau ffisiolegol
Gwell canfod cyfryngau cell
Anfantais
Gofynion fformiwla cyfrwng penodol math o gell
Angen purdeb adweithydd uwch
Arafiad mewn twf
2.2.1 lefel pH
Mae'r rhan fwyaf o linellau celloedd mamalaidd arferol yn tyfu'n dda ar pH 7.4, ac mae'r gwahaniaethau rhwng llinellau celloedd gwahanol yn fach.Fodd bynnag, dangoswyd bod rhai llinellau cell wedi'u trawsnewid yn tyfu'n well mewn amgylchedd ychydig yn asidig (pH 7.0 - 7.4), tra bod yn well gan rai llinellau cell ffibroblast arferol amgylchedd ychydig yn alcalïaidd (pH 7.4 - 7.7).Mae llinellau celloedd pryfed fel Sf9 a Sf21 yn tyfu orau ar pH 6.2.
2.2.2 lefel CO2
Mae'r cyfrwng twf yn rheoli pH y diwylliant ac yn clustogi'r celloedd yn y diwylliant i wrthsefyll newidiadau mewn pH.Fel arfer, cyflawnir y byffro hwn trwy gynnwys byfferau organig (er enghraifft, HEPES) neu CO2-bicarbonad.Oherwydd bod pH y cyfrwng yn dibynnu ar gydbwysedd cain carbon deuocsid toddedig (CO2) a bicarbonad (HCO3-), bydd newidiadau mewn CO2 atmosfferig yn newid pH y cyfrwng.Felly, wrth ddefnyddio cyfrwng wedi'i glustogi â byffer seiliedig ar CO2-bicarbonad, mae angen defnyddio CO2 alldarddol, yn enwedig wrth feithrin celloedd mewn prydau diwylliant agored neu feithrin llinellau celloedd wedi'u trawsnewid ar grynodiadau uchel.Er bod y rhan fwyaf o ymchwilwyr fel arfer yn defnyddio 5-7% CO2 yn yr awyr, mae'r rhan fwyaf o arbrofion diwylliant celloedd fel arfer yn defnyddio 4-10% CO2.Fodd bynnag, mae gan bob cyfrwng densiwn CO2 a argymhellir a chrynodiad bicarbonad i gyflawni'r pH a'r pwysedd osmotig cywir;am ragor o wybodaeth, cyfeiriwch at gyfarwyddiadau'r gwneuthurwr canolig.
2.3 Meithrin plastigion
Mae plastigau meithrin celloedd ar gael mewn amrywiaeth o ffurfiau, meintiau ac arwynebau i weddu i wahanol gymwysiadau diwylliant celloedd.Defnyddiwch y canllaw wyneb plastig diwylliant celloedd a'r canllaw cynhwysydd diwylliant celloedd isod i'ch helpu i ddewis y plastig cywir ar gyfer eich cais diwylliant celloedd.
Gweld holl blastigau meithrin celloedd Thermo Scientific Nunc (dolen hysbysebu)
2.4 Tymheredd
Mae'r tymheredd gorau posibl ar gyfer meithriniad celloedd yn dibynnu i raddau helaeth ar dymheredd corff y gwesteiwr y mae'r celloedd wedi'u hynysu ohono, ac i raddau llai ar y newidiadau anatomegol mewn tymheredd (er enghraifft, gall tymheredd y croen fod yn is na thymheredd y cyhyrau ysgerbydol ).Ar gyfer diwylliant celloedd, mae gorgynhesu yn broblem fwy difrifol na gorboethi.Felly, mae'r tymheredd yn y deorydd fel arfer wedi'i osod ychydig yn is na'r tymheredd gorau posibl.
2.4.1 Tymheredd gorau posibl ar gyfer llinellau cell amrywiol
Mae'r rhan fwyaf o linellau celloedd dynol a mamalaidd yn cael eu cadw ar 36 ° C i 37 ° C ar gyfer y twf gorau posibl.
Mae celloedd pryfed yn cael eu tyfu ar 27 ° C ar gyfer y twf gorau posibl;maent yn tyfu'n arafach ar dymheredd is a thymheredd rhwng 27°C a 30°C.Uwchben 30 ° C, mae bywiogrwydd celloedd pryfed yn lleihau, hyd yn oed os yw'n dychwelyd i 27 ° C, ni fydd y celloedd yn gwella.
Mae angen 38.5°C ar linellau cell adar i gyrraedd y twf mwyaf.Er y gellir cadw'r celloedd hyn ar 37°C, byddant yn tyfu'n arafach.
Gall llinellau celloedd sy'n deillio o anifeiliaid gwaed oer (fel amffibiaid, pysgod dŵr oer) oddef ystod tymheredd eang o 15°C i 26°C.
Amser postio: Chwefror-01-2023